Clonación del genoma completo del virus del moteado amarillo leve del ayote (SYMMoV) e inoculación por métodos biobalísticos - Quirós Álvarez, Marianela 1981- (2006)
El virus del mosaico amarillo leve ·del ayote (SYfvfMoV), es un miembro de los Begomovirus (Geminiviridae), caracterizados por poseer partículas isométricas gemelas, un genoma circular de ADN en simple banda, infectar dicotiledóneas y ser transmitidos por la mosca blanca, Bemisia tabad. En Costa Rica, SYMMoV se ha encontrado asociado a enfermedades en cucurbitáceas, papaya y frijol, con una amplia distribución. Los síntomas asociados a la presencia del patógeno son un leve moteado amarillo y arrugamiento foliar. En este trabajo se u tilizaron muestras de ayote (Cucurbita moschata) recolectadas en San Jerónimo de Naranjo, que presentan la sintomatologia característica de la infección viral Con base en las secuencias virales disponibles (No. accesión GenBank AY064391, AF440790) se diseñaron oligonucleótidos traslapantes específicos para SYMMoV, escogiendo un sitio de restricción úruco en cada componente genómico. Se amplificaron los componentes genómicos completos por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Los productos purificados de la reacción fueron insertados en el vector de donaje pTZS7R/T (Fermentas, Ontario, Canadá) y los plásmidos recombinantes fueron transformados en Escherichia coli XL1-Blue. La presencia del inserto en los dones obtenidos se determinó por digestión con enzimas de restricción. Se secilenció un segmento del componente A clonado usando los iniciadores M13-F-20 y M13-R-27. Se realizaron inoculaciones a plantas sanas de frijol por bombardeo de micropartículas de oro recubiertas del ADN viral previamente digerido en el sitio de clonaje. Las condiciones óptimas para el bombardeo fueron 25 mmHg a 1550psi de presión de rompimiento del disco de la ruptura, y a una distancia de 9cm de la malla de retención a las radículas que fueron bombardeadas con microacarreadores de oro recubiertos con Sug de ADN de cada componente viral. Como con...