Desarrollo de herramientas para el estudio de los mecanismos de virulencia de Brucella abortus - Grijalba Murillo, Muriel; Jensen Gamboa, Evan Bjorck; Chaves Olarte, Esteban 1969- (San Pedro, Montes de Oca, 2003)
Se pretende estudiar la expresión de las proteínas del sistema de dos componentes BvrR-BvrS y de proteínas bajo el control del mismo utilizando anticuerpos específicos. Se sintetizaron dos péptidos el primero correspondiente a una secuencia del sensor BvrS que presentaba alta antigenicidad y homología con otras proteínas sensoras y el segundo correspondiente a una secuencia de la proteína de membrana extema Omp3b, mediante técnica manual en fase sólida utilizando la estrategia F-moc, éstos fueron analizados mediante HPLC. Se inmunizO un conejo con el péptido BvrS para obtener un suero policlonal y posteriormente se purificaron los anticuerpos mediante cromatografia de afinidad. Finalmente se realizo Westem blot de lisados celulares de B. abortus utilizando los anticuerpos anti-BvrS. El análisis del Westem blot indicó que los anticuerpos policlonales anti- BvrS detectaron bandas proteicas cercanas a los 60KDa en los lisados celulares de B. abortus cepa silvestre 2308 y cepa rugosa PerA. El peso molecular esperado para el sensor BvrS es de aproximadamente 66KD, por lo que es probable que los anti - BvrS producidos estén reconociendo al sensor. Los anticuerpos no detectaron ninguna banda proteica en la cepa mutante 2.13 que carece de bvrs y que se incluyó como control negativo, lo mismo sucedió con el lisado celular de la cepa 2.13 que fue reconstituida con el sensor ExoS de S .melitoti donde los anticuerpos anti-BvrS no fueron capaces de reconocer ninguna proteína. Se esperaba un reconocimiento por reacción cruzada de los anticuerpos anti-BvrS contra el sensor ExoS expresado en la cepa 2.13 reconstituida dado el alto grado de homología, sin embargo pareciera que el cambio de tres residuos de aminoácidos en la secuencia fue suficiente para variar las propiedades antigénicas del péptido del sensor BvrS con respecto a las propiedades del sensor ExoS. Con esta herramienta se...
Proyecto de graduación (licenciatura en microbiología y química clínica)--Universidad de Costa Rica. Facultad de Microbiología, 2003.
Keywords: BRUCELLA ABORTUS; BACTERIAS PATOGENAS; ANTIGENOS Y ANTICUERPOS; BRUCELOSIS