Detección intracelular de las toxinas A y B en distintos genotipos de Clostridium difficile - Jiménez Badilla, Iveth 1991- (2015)
Clostridium difficile es un bacilo Gram-positivo anaerobio con capacidad de formar esporas. Esta bacteria es el principal causante de diarrea nosocomial asociada al uso de antibióticos a nivel mundial. Sus principales factores de virulencia son las toxinas A y B (TcdA y TcdB), las cuales se encuentran codificadas en un locus de patogenicidad (PaLoc) junto con las proteínas TcdR, TcdC y TcdE, siendo esta última una proteína tipo holina que posiblemente facilita la secreción de TcdA y TcdB. En los últimos años se ha dado el surgimiento de cepas hipervirulentas de C. difficile, causantes de brotes epidémicos alrededor del mundo y caracterizadas como NAP1/027 por tipificación molecular. Estas cepas exhiben una mayor producción de TcdA y TcdB y expresan altos niveles de resistencia a fluoroquinolonas. El primer informe de brotes epidémicos por estas cepas en América Latina fue hecho en Costa Rica en el 2009, describiéndose además un nuevo genotipo llamado NAPCR1, similar a NAP1 pero sin sobreproducción de toxinas in vitro. El aislamiento y caracterización de cepas a partir de este brote ha permitido estudiar la actividad de las toxinas A y B secretadas por genotipos convencionales y genotipos posiblemente hipervirulentos. En este estudio fue posible realizar la detección por Western Blot de TcdA y TcdB a nivel intracelular de C. difficile en los genotipos NAP1, NAPCR1 y NAP4 en distintos tiempos de la curva de crecimiento, determinando además diferencias en la actividad citotóxica de los contenidos citoplasmáticos de los mismos sobre cultivo celular. Además, se estandarizó un método de Western Blot para la detección de TcdE. La cantidad de toxina A detectada en NAP1 fue mayor que en NAP4 y NAPCR1 a lo largo del tiempo, presentándose una señal fuerte desde las 4 horas. La toxina B solo fue detectada intracelularmente en NAP1 desde las 4 horas y hasta las 48 horas de crecimiento...