Implementación de una técnica de RT-PCR tiempo real para la detección de bornavirus - Barrantes Rodríguez, Xinia María 1979-; Bonilla Vargas, José Alberto 1955- ([San José], Costa Rica, 2009)
El virus de la enfermedad de Barna (VEB) es el agente causal de un desorden inmunopatológico en el sistema nervioso central que afecta varias especies de animales. En humanos se ha asociado con desórdenes psiquiátricos, desórdenes afectivos y esquizofrenia. La detección de VEB se ha basado en inmunohistoquímica, serología y tecnologías basadas en PCR. El establecimiento de un RT-PCR Tiempo real es una nueva herramienta para la detección de un virus de dificil detección. En este estudio se desarrolló un RT-PCR Tiempo Real para la detección de los ARN codificantes para las mayores proteínas virales, p40 (nucleoproteína) y p24 (fosfoproteína) para las cepas Barna V, Barna HE/80, y Barna H1766. Para la cepa No98, por su diferencia con el resto de las cepas, se diseñaron imprimadores y sondas específicas. Se realizaron diluciones de un control de estas secuencias insertas en un plásmido y se estimó una sensibilidad de hasta 100 copias de ARN viral/μL. Se probaron 120 caballos de diferentes zonas del país y se detectaron 8 muestras positivas para p24 (6.6%) y 4 positivas para p40 (3.3%) para Barna V, Barna HE/80, y Barna H1766, y 2 positivas para p24 (1.6%) de la cepa No98, para un total de 12 muestras positivas (10%). También se probaron 50 muestras humanas, 25 muestras de pacientes bipolares I y 25 muestras control de personas aparentemente sanas. De los pacientes bipolares se detectaron 4 muestras positivas para p24 (16%) y 3 positivas para p40 (12%) para un total de 7 muestras positivas (28%) para las cepas Barna V, Barna HE/80, y Barna H1766. En las muestras control no se detectó VEB. Se detecta VEB en forma convincente en Costa Rica, y se reporta la gran especificidad y sensibilidad del PCR Tiempo Real.
Boma Disease Virus (BDV) is the causal agent of an inmunopatologic disorder of the central nervous system that affects several animal species. Viral detection has been based on inmunohistochemistry, serology and PCR technologies. The establishment of a RT-PCR real time is a more sensitive tool for the detection of a virus that produces very lowviremia In this report, we describe a Real Time RT-PCR for the detection of RNA for two major viral proteins, p40 (nucleoprotein) and p24 (phosphoprotein) ofBDV. It is estimated that this method can detecta minimum of 100 copies of viral RNAJμL 120 horses from di:fferent areas of Costa Rica were tested for Boma V, Boma HE/80, and Boma H1766 strains, detected 8 positive p24 samples (6.6%), 4 positive for p40 (3.3%) and 2 positive for p24 (1.6%) for Boma-No98 strain; a total of 12 positive samples (10%). 50 human samples were tested: 25 bipolar I patients and 25 control samples from apparently healthy persons. From them, 4 positive p24 samples (16%), and 3 positive p40 samples (12%) were detected, for a total of 7 positive samples (28%) for Boma V, Boma HE/80, and Boma H1766 strains. Control samples were negative for BDV. This is the first report of BDV detection in Costa Rica and in Central America. The high sensitivity and sensibility ofthe method could explain the high incidence observed.
Tesis (magister scientiae en microbiología)--Universidad de Costa Rica. Sistema de Estudios de Posgrado, 2009.
Keywords: BORNA -- DIAGNOSTICO; REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA EN TIEMPO REAL; REACCION EN CADENA DE LA POLIMERASA DE TRANSCRIPTASA REVERSA; EXPERIMENTACION ANIMAL; EXPERIMENTACION HUMANA EN MEDICINA