Evaluación de protocolos de fijación, procesamiento y extracción de ADN a partir de tejido parafinado y su efecto en la secuenciación de Sanger en el Hospital Nacional de Niños en los años 2020 y 2021 - Zumbado Salas, Marilyn 1989- (2022)
Los laboratorios de genética utilizan diferentes métodos moleculares para el análisis de ácidos nucleicos. Entre los métodos empleados se encuentra la secuenciación (Klug, Cummings, Spencer y Palladino, 2013). El alcance al análisis de los ácidos nucleicos permite acceder a un gran panorama para la investigación, el diagnóstico, pronóstico y tratamiento personalizado de los pacientes. El Servicio de Patología del Hospital Nacional de Niños (HNN) en muchas ocasiones necesita de estudios moleculares para el diagnóstico de pacientes, en cuyos casos la histología no es suficiente o necesita del soporte de estudios genéticos, por lo que es de interés de este Servicio que las muestras que se reciben y procesan, puedan acceder a técnicas moleculares como la Secuenciación Sanger. Para lograr una extracción de ADN sin degradaciones a partir de las muestras provenientes de patología es necesario establecer un protocolo de fijación, procesamiento y extracción de ADN que permita la utilización del tejido para técnicas moleculares. El Servicio de Patología del HNN y la división de Genética Molecular del Laboratorio Nacional de Tamizaje Neonatal y Alto Riesgo (DGM-LTN) no cuentan, al momento de esta investigación, con un protocolo estandarizado para estos casos. Este proyecto pretende ofrecer un protocolo de procesamiento de muestras en Patología y un protocolo de extracción de ADN para estas muestras en la DGM-LTN que permita obtener resultados satisfactorios y valorables para estas muestras, tanto a nivel histológico, como a nivel molecular. Para la realización del proyecto se evaluaron 5 protocolos de procesamiento de tejidos y 3 protocolos comerciales de extracción de ADN para tejidos fijados y embebidos en parafina, para determinar cuáles de estos protocolos brindan los mejores resultados y rendimiento tanto para el análisis histológico como para la aplicación de...