Caracterización de dos aislamientos clínicos autóctonos de Naegleria fowleri : determinación de factores de virulencia y susceptibilidad a fármacos comerciales - Chacón Camacho, Natalia 1995- (2023)
Las amebas de vida libre son protozoarios asociados a infecciones incidentales humanas del sistema nervioso central. Existen tres géneros principales causantes de estas infecciones (Acanthamoeba, Balamuthia, y Naegleria), y dentro del género Naegleria, la especie termófila Naegleria fowleri es la única patógena. Esta ameba está distribuida globalmente y causa una rara y severa enfermedad llamada meningoencefalitis amebiana primaria (MAP), especialmente en niños y jóvenes que practican actividades acuáticas recreacionales. Debido a la falta de estrategias diagnósticas rápidas y tratamientos eficaces, esta infección tiene una tasa de mortalidad de más del 97%. En Costa Rica se han diagnosticado 3 casos de MAP, todos durante el año 2020, de los cuales fue posible obtener los primeros dos aislamientos en cultivo axénico en la historia del país, denominados Guanacaste (Gu) y Limón (Li). El objetivo del presente trabajo es comparar los factores de virulencia y perfiles de susceptibilidad a fármacos comerciales de estos dos aislamientos autóctonos de N. fowleri. Para esto, se realizaron electroforesis SDS-PAGE y zimografías para evaluar el perfil proteico total y de proteasas, respectivamente. Además, se evaluó el efecto citopático de los trofozoítos y los medios condicionados (MC) sobre la línea celular Vero, mediante una serie de experimentos que incluyeron tinciones con cristal violeta, pruebas de viabilidad mediante la cuantificación de deshidrogenasa láctica (DHL), pruebas de viabilidad con el reactivo PrestoBlue® y un estudio proteómico para identificar las principales proteínas secretadas. Finalmente, se evaluaron las concentraciones mínimas inhibitorias 50% (MIC50, por sus siglas en inglés) de la anfotericina B, miltefosina y voriconazol sobre los aislamientos. Los resultados indican que los aislamientos presentan perfiles proteicos similares y proteasas de serina...