Caracterización proteómica de los compartimentos intracelulares tempranos de macrófagos RAW 264.7 en los que transitan dos cepas de Brucella abortus utilizando la plataforma del Instituto Clodomiro Picado y comparación con los resultados obtenidos en una plataforma distinta en trabajos anteriores - Martínez Calderón, Carlos Josué 2000- (2023)
Brucella sp. es una α2-Proteobacteria intracelular causante de infecciones en humanos y animales. Mundialmente al año se presentan 500 000 nuevos casos de brucelosis en humanos, específicamente en Costa Rica del 2003 al 2015 se reportaron 124 pacientes afectados por este agente. Además, las infecciones en ganado bovino repercuten en la industria ganadera al limitar la producción de leche. Durante el proceso de infección Brucella spp. produce cambios en el tráfico intracelular para evitar su eliminación en el lisosoma, finalizando en el retículo endoplasmático; a través de toda esta vía la bacteria modula el entorno a través de diferentes factores de virulencia. Se propone que B. abortus modifica proteómicamente los compartimentos que ocupa en el interior de los macrófagos RAW 264.7 por medio del sistema de secreción VirB. Para comprobar esto se aislaron las vacuolas de macrófagos infectados por B. abortus silvestre y una cepa mutante de VirB a través de un método de ultracentrifugación empleando un gradiente de sacarosa. Se realizó una extracción proteica de dichas vacuolas para finalmente concretar una comparación de la composición proteómica entre ambas. Se utilizó la cepa virB10- como control y el enfoque permitió identificar las proteínas que difieren entre los compartimentos y que tienen un alto poder discriminatorio en el análisis y una relevancia biológica. Para determinar qué proteínas caracterizan exclusivamente los compartimentos contenedores de las cepas 2308W o virB10-, se compararon las listas de proteínas obtenidas y se evaluó su importancia biológica. En este estudio, se implementó un protocolo de enriquecimiento de las vacuolas durante las primeras etapas de infección en macrófagos murinos RAW 264.7. También se compararon las proteínas resultantes de análisis HPLC- MS/MS en cepas diferentes para destacar las diferencias a nivel cualitativo y cuantitativo de los compartimentos intracelulares a las 4...