Caracterización de grumos extracelulares de Brucella abortus - Vargas Moya, María Tiffany 1998- (2023)
Brucella abortus es una bacteria que se encuentra mundialmente distribuida y es causante de la enfermedad conocida como brucelosis, la cual puede afectar tanto a seres humanos como a otros animales mamíferos, incluyendo ganado bovino. Entre las manifestaciones clínicas que se presentan en humanos se encuentran síntomas inespecíficos agudos que pueden volverse crónicos y causar complicaciones más graves; mientras que en animales como vacas es común que cause abortos, bajas en la producción de leche e infertilidad, por ende, genera graves problemas no solo a nivel de salud, sino también pérdidas a nivel económico. B. abortus es un patógeno intracelular facultativo, que una vez que infecta a las células forma vesículas contenedoras de Brucella (VCB), las cuales, en conjunto con diferentes factores de virulencia le permiten redirigir su tránsito intracelular, con el fin de sobrevivir y multiplicarse. Estudios previos han mencionado la presencia de grumos bacterianos extracelulares que podrían estar relacionados a estas vesículas y su salida del espacio intracelular. En esta investigación se realizó una caracterización de los grumos extracelulares de Brucella abortus para compararlos con las vesículas que contienen a Brucella (VCB), específicamente con las VCB autofágicas de Brucella (VCBa), relacionadas con las últimas etapas del tránsito intracelular. Para esto se efectuaron ensayos in vitro en células HeLa y RAW, donde en diferentes tiempos post infección se realizó incubaciones con factor necrotizante citotóxico de Escherichia coli (CNF), lo cual permitió incrementar la formación de grumos intracelulares. Además, se purificaron grumos tanto intra como extracelulares, por medio de un protocolo basado en centrifugación a diferentes velocidades, el cual fue estandarizado y optimizado, para finalmente caracterizar dichos grumos mediante marcaje molecular, tinciones de fluorescencia y medición de tamaño.