Actividad catalítica de lipasas obtenidas de microorganismos del suelo para la bioconversión de derivados de fenilpropanoides del café - Syedd León, Randall Fabio (R. F. Syedd L., 2020)
Las lipasas son enzimas con alta versatilidad química capaces de acelerar reacciones de hidrólisis, esterificaciones, interesterificaciones, acidólisis, alcohólisis y aminólisis. El uso de enzimas en síntesis presenta ventajas sobre los métodos químicos convencionales porque representan menor contaminación por subproductos y los tiempos de reacción son más cortos. Las lipasas pueden por tanto ser usadas para la síntesis de derivados tipo éster de subproductos de cultivos del café tal como los ácidos hidroxicinámicos (AHCs). Experimentalmente se realizó la búsqueda de lipasas partiendo de una colección de microorganismos productores de lipasas procedentes de suelos de fincas de café, bajo el permiso de bioprospección R-CM-001-2016-OT emitido por la Comisión Nacional de Gestión de la Biodiversidad de Costa Rica (CONAGEBIO). La identificación de los microorganismos se realizó por secuenciación de ADN. Se seleccionaron aquellos organismos con capacidad de hidrolizar ésteres de p-nitrofenol (pNP). Se crecieron las cepas puras en medios líquidos inductores para luego obtener las lipasas extracelulares. Se desarrolló la optimización de un método de cuantificación de la actividad enzimática utilizando ésteres de pNP, para ello se consideró el efecto del pH, la temperatura y el medio emulsificante en la sensibilidad del análisis. Posteriormente la actividad enzimática de las lipasas fue evaluada para determinar su rapidez en condiciones de diferente temperatura, pH, concentración salina, longitud de carbonos del sustrato, hidrólisis de éster fenetílico de ácido cafeico (CAPE) y biomasa de desecho de café. Los productos de reacción se analizaron por espectrofotometría y cromatografía de ultra alta resolución con detector de arreglo de diodos UHPLC-DAD.