Desarrollo molecular de un biosensor de cianuro - De La Cruz González, Dafne Dianela; Gómez Pérez, Natasha Natalia; Tejera Núñez, Víctor Hugo; Martínez Torres, Alex Omar (Panamá : Universidad, 2015)
El cianuro es un compuesto extremadamente tóxico, perjudicial para los seres vivos así como para el medio ambiente. A concentraciones muy bajas, inhibe la respiración celular a nivel de la cadena de transporte de electrones. Se utiliza por lo general para la recuperación de metales en las industrias de minería y para la producción de plástico, papel y textiles. Debido a estas aplicaciones y su toxicidad, es necesario supervisar y mantener a niveles subtóxicos los compuestos de cianuro desechados en el medio ambiente. Las metodologías utilizadas para detectar compuestos de cianuro incluyen: espectrofotometría/colorimetría, electroforesis capilar con detección óptica de absorbancia, fluorometría, quimioluminiscencia, espectroscopia de infrarrojo cercano, la espectroscopia de absorción atómica, métodos electroquímicos, espectrometría de masas y cromatografía de gases. En este trabajo, se ha establecido una forma innovadora de detección mediante el diseño de un biosensor a través de un plásmido pSB1C3 expresado en Escherichia coli K-12 (E. coli K-12), adicionando genes capaces de detectar cianuro y compuestos de cianuro con un reportero RFP controlado por un promotor inducible por cianuro obtenido a partir de Pseudomonas pseudoalcaligenes (P. pseudoalcaligenes). Se ha incorporado genes de resistencia al cianuro (cioAB) derivados de la bacteria Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), expresados constitutivamente. Estos genes proporcionan una ruta alternativa para el transporte de electrones que es insensible al cianuro y que no afecta su crecimiento. En total, el nuevo constructo (7.8 kB) consiste en un regulador de la transcripción (cynF), genes cioAB, un promotor inducible por cianuro y un reportero fluorescente (RFP). El cynF y las partes cioAB también incluyen GFP como reportero intermedio de su expresión constitutiva. Se ligó con éxito todas las partes propuestas de nuestro constructo, la expresión no afectó el crecimiento celular. El análisis mediante secuenciación mostró trece mutaciones puntuales, tres de las cuales son silenciosas. El reducido número de mutaciones es sorprendente dada la longitud del constructo y ellas son rescatables con mutagénesis dirigida al sitio.
"Trabajo de graduación para optar por el título de licenciatura en Biología con orientación en Microbiolgía y Parasitología y Zoología". En la página del título.
Keywords: MICROBIOLOGIA DEL AIRE; MICROORGANISMOS; MICROBIOLOGIA -- INVESTIGACIONES; BACTERIAS; CONTAMINACION DEL AIRE; BIOLOGIA -- TESIS Y DISERTACIONES ACADEMICAS