Detección de mutaciones en el gen CFTR, asociadas a pacientes con sospecha de fibrosis quística, mediante la técnica de ARMS-PCR en el laboratorio de genética del C.H. Dr. A.A.M., en el año 2018 - González Alfaro, Ambar
La fibrosis quística (FQ) se produce como consecuencia de una alteración del gen CFTR (conocido como gen regulador de la conductancia transmembrana de la fibrosis quística) situado en el brazo largo del cromosoma 7, es la enfermedad hereditaria autosómica recesiva más frecuente en la población mundial. Ataca las células epiteliales exocrinas, las personas afectadas producen un moco espeso y viscoso, que provoca obstrucción de los conductos de los órganos donde se localiza, siendo el páncreas y los pulmones los órganos más comprometidos, aunque se trata de una entidad multisistémica. De hecho, la enfermedad pulmonar y la insuficiencia pancreática determinan de una forma esencial la evolución, gravedad y mortalidad en la fibrosis quística. Las mutaciones en el gen de la FQ se distribuyen a lo largo de todo el gen, aunque se producen con mayor frecuencia en algunas regiones del mismo, y presentan considerables variaciones según el grupo étnico y/o el área geográfica. La mutación DF508 es la más frecuente; se han descrito en la actualidad más de 1,300 mutaciones del gen CFTR, siendo las más frecuentes: 1F508, G542X, G551 D y R553X. La identificación del gen y de sus mutaciones ha permitido el estudio de la correlación fenotipo/genotipo mediante el análisis de la relación de las diferentes mutaciones presentes con la expresión clínica de la enfermedad. Sabiendo que la fibrosis quística es una enfermedad poco estudiada y con alta tasa de mortalidad, investigamos sobre las mutaciones y su implicación en el pronóstico de vida en pacientes positivos, de manera tal que quede como un aporte valioso en posteriores estudios sobre esta enfermedad. Con el propósito de detectar las mutaciones más frecuentes en el gen CFTR involucrado en fibrosis quística, utilizamos la técnica de ARMS-PCR posterior a la previa extracción de ADN en pacientes con sospecha de fibrosis quística del Laboratorio de Genética del CH.Dr.A.A.M. Mediante la técnica de ARMS-PCR basada en el principio en que los oligonucleótidos con un residuo desigual 3' no funcionarán como iniciadores de la PCR en ciertas condiciones; identificamos las mutaciones del gen CFTR involucrado en la fibrosis quística, entre ellas mutaciones puntuales, inserciones o deleciones en el ADN, por medio de secuencias adecuadas de oligonucleótidos para amplificar y detectar secuencias mutantes o normales de ADN específicas. Cada amplicón o secuencia amplificada se separa mediante electroforesis capilar usando un analizador genético, que lo identifica y clasifica de acuerdo a su tamaño y color, para que posteriormente analizásemos los gráficos que generaba el equipo Genetic-Analizer AB13130. La posibilidad de detectar 50 de las mutaciones en el gen CFTR asociadas a FQ mediante ARMS-PCR, permite que el análisis molecular y caracterización por parte del laboratorio de genética se incluya en la evaluación clínica de los pacientes con sospecha de FQ, como prueba confirmatoria de la enfermedad y clave de su diagnóstico. Está detección permite también la asesoría genética de padres portadores y de igual forma la detección temprana ayudaría a prolongar la esperanza de vida de estos pacientes con tratamientos adecuados.