Efecto de una proteína sobre la invasión de Plasmodium falciparum al eritrocito humano - Mendieta Atencio, Orlando Abdiel; González Ortega, Nahomi Nicole; Torres Atencio, Ivonne Marisol (Panamá : Universidad, 2019)
Alrededor de 21 países en América Latina son endémicos para la malaria, siendo esta la responsable de la pérdida de miles de vidas anualmente a nivel mundial. Para el 2016 se tenían 216 millones de casos de paludismo a nivel mundial, sin embargo, el continente africano se mantiene como la región más afectada con aproximadamente 90% de los casos de esta enfermedad y con 440 000 muertes cada año. Grandes esfuerzos han sido enfocados por parte de científicos e investigadores en la búsqueda de nuevas drogas y en el estudio de interacciones proteicas (ligando - receptor) que eviten la invasión del Plasmodium falciparum al eritrocito humano. Experimentos de invasión realizados con la cepa 1-1133 demostraron hasta un 40% de inhibición, cuando es removido el ácido siálico de las glicoforinas, sin embargo, otros estudios han descubierto un segundo receptor utilizado por el parásito denominado CR1, el cual, al ser bloqueado disminuye el porcentaje de invasión un 20% y junto con las glicoforinas este disminuye hasta un 60%. Gracias a estos estudios nos liemos enfocado en tres principales objetivos para nuestro proyecto: Evaluar el efecto de la laminina en la invasión de Plasmodium falciparum al eritrocito humano. Determinar la concentración ideal de la laminina, capaz de impedir la invasión del mayor número de parásitos. Estimar el porcentaje de inhibición de la laminina sobre la invasión de Plasmodium falciparum en relación con otros receptores ya descubiertos. Estos objetivos fueron logrados mediante: La separación de esquizontes de Plasmodium falcíparum por medios magnéticos, en la cual, con la ayuda de una columna magnética Miltenyi BioTec y gracias al estado férrico de la hemozoína que produce el parásito se lograron separar los esquizontes del resto del cultivo para poder realizar nuestro ensayo de invasión de manera adecuada. El bioensayo de invasión, el cual, es un procedimiento realizado in vitro, que tiene por finalidad evaluar la eficacia de un tratamiento frente a la invasión del Plasmodium falciparum al eritrocito humano. Gota gruesa, mediante la realización de un frotis en un porta-objetos, posteriormente teñido con Giemsa y utilizando un microscopio Olympus CH-2, era posible realizar un conteo del % de invasión de cada pocillo en el bíoensayo de invasión. Tinción con hoechst, esta tinción es utilizada para realizar conteos de % de invasión en un citómetro de flujo, este tinte es permeable a la célula, por lo que al penetrarla y esta no poseer núcleo, tiñe solamente el ADN del parásito que se encuentra en el eritrocito, este tinte es excitable a la luz ultravioleta emitiendo una fluorescencia, la cual es captada por el citómetro e interpretada en números de % de invasión. Los resultados obtenidos de nuestros experimentos son muy prometedores, porque fue obtenido un efecto inhibitorio notable y significante por parte de la proteína en estudio. Se obtuvieron porcentajes de inhibición en un rango de 40 % - 60% en todos los ensayos en los que colocamos solamente la laminina a la concentración de 6,25 µg/ml. También obtuvimos otras dos concentraciones ideales en las cuales la invasión del parásito disminuía, estas fueron: 5,25 µg/ml y 4,25 µg/ml, sin embargo, estas concentraciones requieren ser puestas a prueba nuevamente para poder confirmar su eficacia frente a la invasión del P. falciparum al eritrocito humano.
"Trabajo de graduación para optar por el grado académico de Licenciatura en Tecnología Médica". - Página de título.
Keywords: MALARIA -- DIAGNOSTICO; PLASMODIUM FALCIPARUM -- INVESTIGACIONES; LAMININA -- INVESTIGACIONES -- EVALUACION; GLUCOPROTEINAS -- EFECTOS FISIOLOGICOS; PROTEOMICA; PROTEINAS DE LA SANGRE; ERITROCITOS -- ANALISIS; BIOENSAYOS; TECNOLOGIA MEDICA -- TESIS Y DISERTACIONES ACADEMICAS