Detección de la mutación K76T del gen PFCRT y TYR 184 PHE del gen PFMDR1 de Plasmodium falciparum em aislados de campo procedentes de zonas endémicas a malaria en Panamá - De Gracia Brias, Amilcar Ameth
La malaria es una infección parasitaria causada por protozoarios del género Plasmodium y transmitida por el mosquito del género Anopheles, donde Plasmodium vivax es la especie de parásito más extendida a nivel mundial y Plasmodium falciparum la más letal. El uso prolongado de antimaláricos y el desarrollo de resistencia por parte del parásito ha dado como resultado el resurgimiento de esta enfermedad. Este trabajo tiene como objetivo principal el análisis de muestras de pacientes infectados con P. falciparum, para detectar mutaciones asociadas a resistencia a cloroquina y diversos antimaláricos. Las muestras de ADN utilizadas fueron colectadas en papel filtro (Whatman 3MM) y almacenadas en bolsas plásticas debidamente rotuladas. Las muestras proceden de diferentes áreas endémicas a malaria en nuestro país (Guna Yala, Darién, Panamá Este, Bayano) y casos importados provenientes de países de África y Asia. Se utilizó el kit comercial QiAamp DNA mini kit (marca Qiagen) para realizar las extracciones de ADN de las muestras. Posteriormente se realizó el análisis de las muestras con la técnica de PCR nested para detectar la mutación pfcrt k76t, donde se utilizaron los primers CRTP1 y CRTP2 en la amplificación inicial y para la segunda amplificación se utilizaron los primers CRTD1 y CRTD2. Para el análisis de la mutación de pfmdr1 se utilizaron los primers A2 y A4. Finalmente se utilizaron enzimas de restricción para detectar el alelo mutante en las muestras. Se encontró en 54/62 muestras analizadas la mutación pfcrt k76t representado un 87,1%, lo cual nos indica que estás muestras están asociadas a la resistencia a cloroquina. En el análisis de la mutación pfmdr1 tyr-phe se detectó en 32/35 muestras analizadas, representando un 51,6%, lo que indica que esas muestras positivas están vinculadas con resistencia a cloroquina, halofantrina y mefloquina. Tanto la mutación pfcrt k76t como la mutación pfmdrl tyr-phe fueron detectadas en más del 85% de las muestras analizadas en nuestro estudio. De ambas mutaciones estudiadas, el gen crt mostró ser un buen marcador molecular asociado para la detección de la resistencia a la cloroquina.