Caracterización molecular de parásitos del género Leishmania en lesiones cutáneas con frotis y cultivo negativos - Reina, Adelys
Entre las zoonosis parasitarias endémicas en Panamá, la Leishmaniasis Cutánea (LC) presenta las incidencias más altas con 1,000-3,000 casos anuales. El diagnóstico parasitológico de esta infección se basa en la demostración microscópica del parásito en frotis teñidos y cultivos realizados a partir de las lesiones. Sin embargo, con frecuencia estos análisis resultan negativos aun cuando las pruebas moleculares (PCR) confirman posteriormente la infección. El objetivo principal de este estudio fue detectar y caracterizar molecularmente los parásitos del género Leishmania presentes en lesiones cutáneas con frotis y cultivo negativos. Para ello se evaluaron 123 muestras de ADN procedentes de lesiones de LC de pacientes que asistieron a la Unidad de Diagnóstico, Investigación Clínica y Medicina Tropical del ICGES entre el período del 2015 al 2019. Estos casos presentaron diagnósticos directos negativos, pero fueron confirmados por alguna metodología molecular. Las muestras fueron evaluadas inicialmente con 4 técnicas de PCR que amplifican las siguientes regiones: (1) KDNA-Viannia específico, (2) KDNA-Género específico, (3) Hsp70-Género específico y (4) qPCR 18S ribosomal. Los hallazgos confirman la mayor sensibilidad de la PCR KDNA-Viannia específico (100%). Los resultados de la qPCR18S ribosomal, mostraron una sensibilidad de 77.6%. Adicionalmente, 69 muestras positivas en el PCR-Hsp-70 fueron caracterizadas a nivel de especie mediante un análisis RFLP con las enzimas Hae III y Bcc 1; correspondiendo un 59.4% a L. (y.) panamensis y 40.6% a L. (y.) guyanensis. Finalmente, los productos de amplificación del PCR-Hsp-70 fueron purificados y secuenciados para un análisis filogenético que incluyó 38 secuencias. Veintiuna de las secuencias evaluadas se agruparon con una secuencia referencia de L. (y.) panamensis, mientras que 11 caracterizadas por RFLP como L. (y.) guyanensis se agruparon con el grupo de la variante genética denominada Leishmania sp.1. Según nuestros resultados, en estas lesiones de LO con baja carga parasitaria predomina L. (y.) panamensis, sin embargo, la variante genética Leishmania sp.1 también se vincula con frecuencia con este tipo de lesiones. En ningún caso se logró demostrar una asociación significativa entre estas lesiones con baja carga parasitaria y otra característica clínico-epidemiológica. Los resultados de este estudio refuerzan la utilidad de los métodos moleculares en el diagnóstico de la LO, especialmente en lesiones con baja carga parasitaria. Además, señalan las especies/variantes genéticas de Leishmania involucradas, así como las características clínico/epidemiológicas vinculadas con este tipo de lesión.