Identificación de genes como nuevos blanco en melanoma resistente a inhibidores de Braf - Mela Sánchez, Carmen I.; Castro-Pérez, Edgardo (Panamá : Universidad, Vicerrectoría de Investigación y Postgrado, 2023)
El melanoma es la enfermedad más mortal de la piel, el órgano más grande del cuerpo humano. El melanoma surge debido a la transformación maligna de los melanocitos, los cuales acumulan alteraciones genéticas que conllevan a su proliferación y diseminación anormal. Este cáncer es propenso a metástasis y a recurrencia, y representa cerca del 75% de la mortalidad asociada al cáncer de piel. En melanoma, la vía de transducción intracelular MAPK muestra hiperactividad debido a mutaciones en el gen BRAF. En particular, la mutación BRAFV600E se encuentran en 60-65% de los melanomas. Los tumores con esta mutación no responden a la quimioterapia y los pacientes tienen un pronóstico desfavorable. Terapias desarrolladas para inhibir específicamente el oncogén BRAFV600E (Inhibidores de BRAF, BRAFi) han mostrado alta eficacia a corto plazo, sin embargo, prácticamente todos los pacientes desarrollan metástasis agresiva con resistencia al inhibidor BRAF (BRAFi). Esto deja a los pacientes sin opciones de tratamiento y con sobrevivencia menor al 20%, por lo que la identificación de nuevos blancos para el desarrollo de tratamientos más efectivos es una prioridad. La resistencia a inhibidores BRAFi y agresividad en melanoma se han asociado con células madre cancerígenas (CSC, del inglés "cáncer stem cells") conocidas como células madre de melanoma (MSC, del inglés "melanoma stem cells") y activación de genes de células madre/MSC. Sin embargo, se desconocen los mecanismos y genes implicados en activación de MSC, sobrevivencia y resistencia a tratamientos. Para abordar esto, en esta investigación nos propusimos identificar genes como nuevos blancos contra melanoma mediante análisis de transcriptoma. Para esto comparamos la expresión diferencial decélulas de melanoma metastásico sensibles a BRAFi y células metastásicas resistentes a este inhibidor. Los genes identificados preliminarmente fueron sometidos a varios criterios de análisis de expresión y sobrevivencia. Nos enfocamos en identificar genes asociados a células madre como candidatos involucrados en la adquisición de resistencia a los inhibidores de BRAFi en células sensibles al inhibidor. Los análisis identificaron el gen SOX10 como un potencial gen candidato, por lo que nos enfocamos en el mismo para estos estudios. En primer lugar, SOX10 es un factor de transcripción que normalmente se expresa en desarrollo y en células madre, por lo que hipotetizamos que el mismo podría estar involucrado en activación de mecanismos de MSC, sobrevivencia y resistencia a BRAFi. Estudios de Western blot, determinaron que SOX10 no sólo muestra expresión basal, sino también que su expresión es inducida como resultado del tratamiento con el inhibidor de BRAF. La inducción de SOX10 por el inhibidor nos sugirió que el mismo podría tener un papel en mecanismos de adquisición a resistencia de BRAFi, en la activación de MSC y sobrevivencia del melanoma. Para confirmar esto, silenciamos molecularmente la expresión de SOX10 mediante tratamiento con shRNA-mediado por lentivirus. Los datos demostraron que el tratamiento con shRNA redujo la expresión de SOX10 en más del 70%. Bioensayos de sobrevivencia celular MTT demostraron que inhibir SOX10 mata a las células de melanoma a corto plazo a las 24h, 48h, 72h y 96h. Además, bioensayos de clonogenicidad demuestran que inhibir SOX10 con shRNA mata a las células de melanoma a largo plazo a las dos (2) semanas. Estos datos in vitro demuestran que SOX10 es requerido para la sobrevivencia del melanoma, por lo que sería un buen candidato para el XI posible desarrollo de nuevos tratamientos. Estudios futuros in vivo mediante modelos de ratones de xenotransplante confirmarán estos resultados.
"Tesis presentada como uno de los requisitos para optar por el título de Maestría en Biología Molecular". -- Página de título.
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