Caracterización de bacteriófagos provenientes de aguas residuales de Río Abajo, ciudad de Panamá, con actividad an-timicrobiana contra el complejo enterobacter cloacae
Bacteriófagos (fagos) son los virus que infectan bacterias. Estos virus son de gran interés debido a su habilidad de atacar específicamente a las bacterias. Los fagos en algunas regiones del mundo (por ejemplo, el Fagolac® en Chile, SalmoFree® en Colombia) suelen ser usados en la industria alimentar...
| Autor principal: | |
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| Formato: | Tesis Conjunto Libro |
| Lenguaje: | Spanish |
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| Acceso en línea: | http://up-rid.up.ac.pa/4497/1/ednner_victoria.pdf |
| Sumario: | Bacteriófagos (fagos) son los virus que infectan bacterias. Estos virus son de gran interés debido a su habilidad de atacar específicamente a las bacterias. Los fagos en algunas regiones del mundo (por ejemplo, el Fagolac® en Chile, SalmoFree® en Colombia) suelen ser usados en la industria alimentaria para el control de patógenos y también, han sido propuestos para el tratamiento de enfermedades bacterianas (PYO Bacteriophage Tbilisi, Georgia), como fagoterapia. El Enterobacter cloacae, patógeno oportunista, es una de las principales bacterias que causan muchas infecciones extraintestinales en los hospitales. El objetivo de este estudio fue caracterizar bacteriófagos aislados en aguas residuales de Río Abajo con actividad antimicrobiana contra el Complejo E. cloacae, de acuerdo con sus propiedades biológicas y moleculares. En este estudio se utilizó una muestra de agua del Río Abajo para aislar los fagos, usando los métodos de enriquecimiento y ensayo de doble capa de agar. Una morfología de las Unidades Formadoras de Placa (UFP) en el agar, que fue la más grande y predominante, y por esta razón, fue seleccionada para realizar su caracterización. Se realizaron tres rondas de purificación para asegurar la homogeneidad del fago, basándose en las características morfológicas de las placas. También, se realizaron ensayos de caracterización biológica (estabilidad frente a rangos de pH, temperatura, sensibilidad a la luz ultravioleta (UV) y al cloroformo) y, además, la especificidad de huésped. Se aisló un fago cuya UFP es clara, redonda, de 6 x 9 mm de diámetro y con una concentración en stock de 4.7 x 107 UFP/mL. También, se observó que en las diluciones de 10-4 y 10-5 fue donde se obtuvo el mejor rendimiento de fagos, los cuales fueron capaces de lisar el 86% de la bacteria huésped. La especificidad del huésped frente a diferentes especies bacterianas (S. aureus, P. aeruginosa, E. aerogenes y E. coli) fue negativa, en comparación con la E. cloacae, para la cual la lisis fue completa. En la curva de pH, se observó que hay una mejor estabilidad del fago entre pH 7 a 10. En cuanto a la temperatura, se observó que los fagos son más estables 37º y 50ºC y, además, se observó que arriba de esta temperatura, hubo una notable disminución del título viral. En la sensibilidad a la luz UV, se observó que en los primeros 15 minutos frente a está la tasa de replicación se reduce a cero. Incluso, se observó que el fago aislado denominado Enterobacter phage vB_EcRAM-01, presenta estabilidad a temperaturas entre 25º y 50°C y pH alcalinos entre 7- 11. El fago aislado contra el complejo E. cloacae, produce UFP claras, lo cual es indicador que es un fago lítico. Además, se pudo observar una estrecha especificidad de huésped, es decir solo infecta al E. cloacae. En cuanto a la caracterización molecular, se reveló que el fago vB_EcRAM-01, es un miofago de 178477 pb con un contenido de 45.8% de G+C y con aproximadamente 294 genes presentes, incluyendo genes que codifican proteínas estructurales, inactivación, adsorción a las células, inyección de ADN y caracterización de enzimas líticas. Adicionalmente, este genoma posee 2 ARNt en su genoma, el ARNt-Met (cat) el cual posee 77 bases y 55.8% de G+C, y el ARNt-Gly (tcc) con 76 bases y 47.4% de G+C. Además de sus genes que codifican proteínas estructurales, de modificación y replicación del ADN, también posee genes de holinas y endolisinas, que son propios de un bacteriófago lítico. |
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| Notas: | "Trabajo de graduación para optar al título de Máster en Ciencias Biomédicas con énfasis en Microbiología". -- Página de título. En: UP-RID |
| Descripción Física: | xi, 116 páginas : ilustraciones ; 28 cm 1 memoria USB : color ; 2 x 6 cm |